在繼續探討HGC-27細胞,即人未分化胃癌細胞的操作步驟時(shí),我們需細致入微地確保每一步的精確性和無(wú)菌操作的重要性。
首先,進(jìn)行細胞復蘇時(shí),需快速將凍存的HGC-27細胞從液氮中取出,并迅速置于37℃水浴中輕輕搖晃,確保細胞在1分鐘內融化。隨后,將細胞懸液轉移至預裝有培養基的離心管中,輕柔混勻后離心,去除上清液,再加入新鮮培養基重懸細胞,接種至培養瓶中,置于37℃、5% CO2的恒溫培養箱中培養。
細胞傳代時(shí),待細胞長(cháng)至80%-90%融合度,棄去舊培養基,用PBS清洗兩次后,加入適量胰酶消化細胞,待細胞變圓、間隙增大時(shí),加入培養基終止消化,吹打制成細胞懸液,按一定比例分至新的培養瓶中繼續培養。
此外,細胞凍存也至關(guān)重要。選擇對數生長(cháng)期的細胞,按上述方法消化、離心后,用細胞凍存液重懸細胞,調整細胞密度至適宜范圍,分裝至凍存管中,標記好細胞名稱(chēng)、凍存日期等信息后,按梯度降溫法逐步冷凍,最終置于液氮中長(cháng)期保存。
在整個(gè)操作過(guò)程中,嚴格的無(wú)菌操作、精準的細胞計數以及適時(shí)的培養基更換,都是確保HGC-27細胞健康生長(cháng)和實(shí)驗成功的關(guān)鍵。